1 - Déposer une goutte d'eau physiologique sur une lame.
L'examen parasitologique des selles
Les échantillons de selles doivent être fraichement recueillis, portés le plus rapidement au laboratoire
surtout si la présence de protozoaires est suspectée car la viabilité des formes végétatives
avec leur mobilité est une critère d'identification très fragile.
Il faudra renouveler l'analyse à plusieurs reprises car l'élimination des parasites n'est pas continue.
Dans certains cas bien particuliers comme la suspicion d'oxyurose, la recherche d'oeufs au niveau des selles est très souvent négative. Le test de Graham (ou scotch test) est de préférence pratiqué. Il consiste à recueillir au lever à l'aide d'un ruban adhésif les oeufs pondus sur les marges anales par la femelle durant la nuit. Le ruban est ensuite collé sur une lame de verre qui sera observée au microscope.
1 - L'examen macroscopique
L'analyse commence par cette étape qui note :
- la quantité (entre 100 et 150 g)
- la couleur : normalement brune (transformation de la birirubine en sterchobiline), pouvant être pathologiquement décolorée, jaune, verte, noir (sang digéré), rouge (hémorragie basse ou aliments comme betterave)
- la consistance des selles : normalement souple et moulée (gardant le moule de l'intestin), pouvant être moulée dure, pâteuse, molle, très molle, liquide
- la présence éventuelle de glaires (mucus), de sang ou de parasites adultes comme des Ascaris adultes ou des anneaux de Taenia
2 - L'examen microscopique
Il est réalisé à partir de plusieurs préparations, comme par exemple :
L'état frais
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Le but est d'obtenir une préparation suffisamment chargée pour être significative mais aussi suffisamment claire pour y lire au travers des lettres d'imprimerie. L'intégralité de la préparation sera observée au microscope à faible grossissement (x 100) puis à un grossissement plus fort en se déplaçant en diagonale et en étant attentif aux éventuels mouvements, signe d'une forme végétative ou d'une larve vivante.
2 - Prélever avec un agitateur à différents endroits de la selle.
3 - Dissocier les matières fécales dans la goutte.
4 - Recouvrir d'une lamelle en appuyant légèrement.
Les concentrations
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Le but est d'obtenir, sous un faible volume, les éventuels parasites présents dans une portion de selles.
Elles sont nombreuses tant au niveau de leur principe que des solutions utilisées. Elles ont donc chacune leurs avantages et leurs inconvénients.
Il faut donc les choisir en fonction du contexte et des parasites recherchés.
Au niveau des principes se distinguent les techniques purement physiques (flottation ou sédimentation en fonction de la densité du liquide de dilution) des techniques physicochimiques ou diphasiques.
Ces dernières sont les plus utilisées en recherche courante. Elles permettent de séparer les éléments indésirables : hydrosolubles, non solubles et liposolubles
des formes parasitaires qui se retrouvent en majorité dans le culot de centrifugation.
1 - Déposer une noix de selles prélevée à différents endroits dans un verre à pied.
2 - Diluer progressivement au 1/10 ième (selle moulée) par le liquide de la phase aqueuse en triturant à l'aide d'un agitateur.
3 - Attendre environ 5 minutes le dépôt des débris lourds avant de filtrer le surnageant sur un tamis type chinois dans un autre verre à pied pour éliminer les débris volumineux.
4 - Remplir aux 2/3 un tube conique à usage unique et compléter sous sorbonne avec 1/3 d'éther. Boucher hermétiquement le tube.
5 - Agiter durant une minute le tube d'un mouvement vif et horizontal.
6 - Centrifuger ce tube durant 3 minutes à 1500 tours par minute.
7 - Observer l'aspect du tube à la sortie de la centrifugeuse montrant quatre phases : les trois supérieures (phase aqueuse, débris insolubles, phase éthérée) qu'il faut éliminer et le culot.
8 - Vider le tube débouché par retournement au dessus du conteneur pour déchets chimiques.
9 - Essuyer, sans retourner le tube, les parois à l'aide d'un papier ou coton tenu par une pince.
10 - Retourner le tube et diluer au 1/2 le culot en eau physiologique. Laisser monter le contenu du culot par capillarité dans l'effilure d'une pipette.
11 - Réaliser des montages entre lame et lamelle jusqu'à ce que la totalité du culot soit épuisé ...
12 - Observer au microscope l'ensemble au grossissement x100 puis x400.
L'extraction
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Le but est de d'attirer les larves d'helminthes hors des selles vers un volume d'eau chaude en se basant sur leur hydro-thermo-tropisme positif.
1 - Préparer le montage suivant : sur un support, positionner un entonnoir muni d'un robinet dans lequel peut se placer un tamis métallique.
2 - Envelopper une grosse noix de selles dans plusieurs épaisseurs de gaze.
3 - Placer le paquet obtenu dans un tamis type chinois.
4 - Verser un volume d'eau chaude dans l'entonnoir, le robinet en position fermée de telle façon que l'eau affleure le bas du tamis placé dans l'entonnoir.
5 - Attendre une demi-heure.
6 - Soutirer le volume d'eau dans un tube.
7 - Centrifuger ce tube durant 3 minutes à 1500 tours par minute.
8 - Observer le culot de centrifugation au microscope au grossissement X100. Les larves doivent y bouger énergiquement. Si cet examen est négatif, renouveler l'eau chaude et procéder à une autre extraction.
Les colorations
Le but est de mettre en évidence des structures cellulaires des parasites afin d'en faciliter l'identification.
La plupart des colorants est toxique pour les cellules et a pour conséquence de tuer des formes végétatives.
La coloration peut avoir lieu
- - par ajout de colorant (comme le Lugol) entre lame et lamelle,
- - par coloration (comme le MIF Merthiolate Iode Formol) en tube d'une petite quantité de selles ce qui permet de plus sa conservation,
- - par coloration de frottis préalablement étalés et fixés.
