Déposer une petite goutte à l'une des extrémités de la lame propre et parfaitement dégraissée.
L'examen parasitologique du sang
Les échantillons de sang sont prélevés en règle générale sur anticoagulant anticalcique (Complexon III) et doivent être traités très rapidement car l'anticoagulant altère rapidement la cytologie des parasites sous forme végétative ainsi que les cellules sanguines environnantes.
En cas de prélèvement capillaire, ils le seront immédiatement pour éviter toute coagulation.
1 - Le frottis mince coloré au May Grünwald Giemsa
Le but est d'obtenir sur une lame de verre une couche unicellulaire de cellules sanguines et d'éventuels parasites répartis de façon homogène sur tout le frottis et fixées dans l'aspect le plus proche de leur état physiologique.
Positionner l'étaleur de façon à prendre la totalité de la goutte en la laissant se répartir de façon homogène le long du biseau.
Appliquer un mouvement de translation horizontale, en maintenant la spatule d’un angle de 45° environ, sans appuyer, tout au long de la lame et laisser sécher.
Les frottis seront ensuite colorés par la méthode de May Grünwald Giemsa basée sur l'action complémentaire d'ions colorants dissociés en eau neutre sur les structures cellulaires.
Les quatre types d'affinité : acidophile, basophile, neutrophile et azurophile permettront de caractériser ces structures cellulaires et ainsi d'identifier plus facilement les formes parasitaires.
L'observation des frottis colorés se fera au petit grossissement à la recherche de parasites de grande taille comme les microfilaires (150 µm de longueur) en particulier dans les franges des frottis.
Puis le parcours du frottis aura lieu à l'immersion pour les formes parasitaires de plus petite taille (une dizaine de micromètre).
2 - La goutte épaisse colorée au May Grünwald Giemsa
Cette technique est mise en oeuvre afin d'identifier, dans une quantité de sang supérieure à celle nécessaire à la réalisation d'un frottis mince.
Déposer sur une lame propre et dégraissée une goutte de sang capillaire.
Défibriner le sang en tournant dans la goutte à l'aide de la microlance ayant servi au prélèvement (geste à réaliser également pour une meilleure adhérence pour un sang recueilli sur anticoagulant)
Laisser sécher 24 heures à température du laboratoire (ou 2 heures à 37°C avec des résultats moins performants).
Hémolyser le sang en ajoutant doucement de l'eau distillée.
Renouveler
jusqu'à ce que l'eau reste incolore.
Les gouttes déshémoglobinisées et séches seront ensuite fixées puis colorées comme le frottis mince par la méthode de May Grünwald Giemsa (ou au Giemsa seul).
La recherche aura lieu sur les préparations au microscope au faible grossissement pour les parasites de grande taille ou à un plus fort grossissement pour ceux de petite taille.
Il s'agit de repérer et d'examiner parasites extraglobulaires (microfilaires, trypanosomes) afin de les identifier.
La technique permet aussi de repérer des protozoaires érythrocytaires dans les cas de pauciparasitémies.
Dans ce dernier cas, l'identification est délicate car il n'y a plus de contexte cellulaire, les hématies étant lysées.
Si la goutte de sang est calibrée (dépôt d'un volume précis et connu de sang), il est possible de déterminer la concentration du sang en formes parasitaires.