Déposer une petite goutte à l'une des extrémités de la lame propre et parfaitement dégraissée.
La qualité des frottis
Il est indispensable que les frottis sanguins et médullaires sur laquelle l'identification est réalisée soient de bonne qualité.
1 - Qualité du sang
Le temps de contact avec l'anticoagulant doit être aussi bref que possible afin que les cellules aient l’aspect le plus proche possible de leur état physiologique.
Après ½ heure de contact, il y a de fortes modifications qui vont s'amplifier avec le temps :
- gonflement des plaquettes qui se transforment en macroplaquettes voire en plaquettes géantes ne permettant plus la distinction avec des états pathologiques
- vacuolisation des cellules fragiles telles les grands lymphocytes et les monocytes
- picnose : fragmentation des noyaux des cellules en apoptose
- basophilie des cytoplasmes
2 - Etalement
Le but est d'obtenir sur une lame de verre une couche unicellulaire de cellules sanguines ou médullaires réparties de façon homogène sur tout le frottis et fixées dans l'aspect le plus proche de leur état physiologique.
Positionner l'étaleur de façon à prendre la totalité de la goutte en la laissant se répartir de façon homogène le long du biseau.
Appliquer un mouvement de translation horizontale, en maintenant la spatule d’un angle de 45° environ, sans appuyer, tout au long de la lame et laisser sécher.
3 - Qualité d'un bon frottis
- de bonne taille (½ à ¾ de la lame)
- homogène
- de bonne densité, ni trop fin, ni trop épais
- montrant une goutte étalée en entier
- distant des bords de la lame donc accessible en tout point à l’observation microscopique
4 - Frottis défectueux
frottis trop petit et non homogène
-> lame grasse ou poussièreuse
frottis strié
-> geste mal maitrisé avec mauvais contact entre l'étaleur et la lame
frottis trop épais et goutte non étalée en entier
frottis trop épais et trop court
frottis trop fin et frangé
-> appui trop fort sur l'étaleur ou angle trop incliné
frottis non étalé en entier
-> arrêt de l'étalement brusque et non épuisement naturel du sang
5 - Frottis de moelle
La ponction médullaire
Elle aura lieu au niveau d'un os plat comme le sternum ou l'épine illiaque postérieure.
Pour la réaliser, le matériel suivant sera nécessaire :
- un trocart (aiguille creuse)
- un mandrin (aiguille pleine qui bouche le trocart lors de l'introduction dans les tissus)
- une seringue pour aspirer le suc médullaire.
Les étalements
Plusieurs gouttes de prélèvement seront étalées en des frottis minces (selon la même technique que pour le sang) tout en sachant qu'ils seront moins homogènes.
Il faudra prendre soin de tiédir les lames bien dégraissées car la moelle osseuse prélevée est un tissu riche en graisse.
L'une d'elles sera colorée par la technique du MGG et les autres pourront servir à des colorations cytochimiques éventuellement indispensables au diagnostic.