Les colorations
Le but final de la technique est d'obtenir des coupes colorées mettant en évidence les différents tissus.
Les colorations sont précédées, en cas d'inclusion en paraffine, par un déparaffinage et une réhydratation.
Elles sont suivies d'une déshydratation, passage dans un solvant du liquide de montage et d'un montage sous lamelle de verre.
Elles mettent en évidence selon les techniques utilisées :
1 - Les éléments de base
Ces colorations permettent de localiser sur l'image microscopique les principaux tissus :
Extemporané Bleu de Toluidine sur coupe à congélation
Principe
Coloration histochimique utilisant le principe de la métachromasie,
propriété du bleu de toluidine, de donner au tissu sur lequel il se fixe des couleurs
variant du bleu au rouge.
Le colorant chargé positivement se fixe et polymérise sur des substances tissulaires chargées négativement.
Résultats obtenus
- Noyaux : bleus foncés sur un fond bleu clair
- Granulations des mastocytes : pourpres à violacées comme les noyaux et les mucopolysaccharides.
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Extemporané Hémalun, Éosine (H.E.) sur coupe à congélation
Principe
Coloration histologique topographique, associant
une coloration nucléaire par l’hématoxyline de Harris
à une coloration des cytoplasmes et du collagène par l’éosine Y.
L’éosine Y colore les cytoplasmes en rose et les fibres dans une gamme de roses plus ou
moins vifs selon l’acidophilie des différents éléments.
Résultats obtenus
- Noyaux : bleus violets
- Cytoplasmes : roses
- Hématies : rouges clairs à jaunes
- Fibres de collagène : roses – orangées.
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Hémalun Phloxine Safran (HPS)
Principe
Coloration histologique topographique standard trichromique associant
- à une coloration nucléaire par l’hémalun,
- une coloration cytoplasmique par la phloxine
- et une coloration du collagène par le safran.
Résultats obtenus
- Noyaux : bleus violets
- Cytoplasmes : roses
- Hématies : rouges ou non colorées
- Fibres de collagène : jaunes
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Hémalun Éosine (HE)
Principe
Coloration histologique topographique, associant
- une coloration nucléaire par l’hématoxyline de Harris
- à une coloration des cytoplasmes et du collagène par l’éosine Y.
L’éosine Y colore les cytoplasmes en rose et les fibres dans une gamme de roses plus ou moins vifs selon l’acidophilie des différents éléments.
Résultats obtenus
- Noyaux : bleus violets
- Cytoplasmes : roses
- Hématies : rouges clairs à jaunes
- Fibres de collagène : roses – orangées
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2 - Les fibres
Ces colorations mettent spécifiquement en évidence des structures comme les fibres de collagène et les fibres élastiques.
Gordon Sweets
Principe
Coloration des fibres de réticuline argyrophiles par fixation sélective du nitrate d'argent ammoniacal réduit ensuite en précipité d'argent noir par l'action du formaldéhyde.
Résultats obtenus
- Fibres de réticuline : noires
- Noyaux : rouges sur fond rose
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Orcéine
Principe
Coloration due à la grande électivité de l’orcéine, acide faible pour les fibres et lames élastiques.
Résultats obtenus
- Fibres élastiques : brun acajou
- Noyaux et cytoplasmes : rouge à rose
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Rouge Sirius
Principe
Coloration due à la fixation empirique du rouge Sirius sur les fibres de collagène et de réticuline.
Résultats obtenus
- Noyaux : bleus ou jaunes
- Cytoplasmes : jaunes
- Fibres de collagène et de réticuline : rouges
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Trichrome de Masson
Principe
Coloration histologique topographique trichromique, associant
- à une coloration nucléaire (hématoxyline),
- une coloration cytoplasmique par un mélange de colorants acides (Fuchsine-Ponceau)
- et une coloration élective du collagène (Vert lumière).
Résultats obtenus
- Noyaux : bleus noirs
- Cytoplasmes : roses à rouges
- Hématies et kératine : rouges vifs
- Fibres de collagène et de réticuline : vertes
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Weigert
Principe
Coloration empirique des fibres élastiques par une solution de résorcine et fuchsine basique précipitée par le perchlorure de fer (réactif de Weigert).
Résultats obtenus
- Fibres élastiques : violet-noir
- Noyaux et cytoplasmes : bleus ou roses
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3 - Les lipides
Ces colorations mettent spécifiquement en évidence les lipides en phase liquide.
Oil Red'O
Principe
Mise en évidence des lipides hydrophobes en phase liquide sous forme d'un corps coloré appelé lysochrome.
Résultats obtenus
- Noyaux : bleus
- Gouttelettes lipidiques : rouges
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4 - Les mucines
Ces colorations mettent spécifiquement en évidence des mucopolysaccharides.
Bleu Alcian
Principe
Coloration des mucopolysaccharides carboxylés par fixation électrostatique du Bleu Alcian à pH acide voisin de 2,6.
Résultats obtenus
- Mucopolysaccharides (MPS) acides : bleu turquoise
- Noyaux : rouges sur fond rose
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Peroxyde Acide Schiff (PAS)
Principe
Coloration, par le réactif de Schiff, des aldéhydes libérés par l'oxydation lente des groupements glycols des glucides par l'acide périodique.
Résultats obtenus
- Glycogène et mucopolysaccharides neutres (MPS) : rose-fuschia / magenta
- Noyaux : bleus / violets
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5 - Les pigments
Ces colorations mettent spécifiquement en évidence différents pigments comme la mélanine ou l'hémosidérine.
Fontana
Principe
Imprégnation des pigments par précipité d’argent métallique noir d'un sel d’argent ammoniacal.
Résultats obtenus
- Pigments argento-réducteurs : noirs
- Noyaux : rouges
- Fond : rose
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Perls
Principe
Mise en évidence des ions ferriques (Fe +++ ) formant, en milieu acide, avec le ferrocyanure de potassium, un précipité de ferrocyanure ferrique de couleur bleu.
Résultats obtenus
- Granulations ferriques : bleu vert (Bleu de Prusse)
- Noyaux : rouges
- Fond : rose
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6 - Certains microorganismes
Ces colorations mettent en évidence des structures cellulaires appartenant spécifiquement à certains microorganismes.
Ziehl modifiée
Principe
Coloration de la paroi de certaines bactéries dites acido alcoolo résistantes par un un mélange de fuchsine basique et de phénol qui résiste à la différenciation par l'alcool et l'acide.
Résultats obtenus
- Corps bactériens : rouges
- Fond de la préparation : bleu
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Gomori Grocott
Principe
Réduction du complexe d'argent méthénamine par les aldéhydes provenant des glucides des parois des champignons oxydés.
Résultats obtenus
- Parois des champignons, parasites et levures : noires
- Fond de la préparation : vert
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